EasyPlate™磁极EasyPlate™ EasySep™ Magnet#18102专为处理少量细胞(每孔最多2x10^7个细胞)进行细胞分选操作而设计。EasyPlate™EasySep™Magnet产生高梯度磁场,其强度足以分离使用EasySep™D磁珠标记的细胞。EasyPlate™EasySep™磁体设计用于容纳圆底非组织培养处理的96孔板。
下面以EasySep™ Mouse B Cell Isolation Kit#19854 为例,简述使用EasyPlate™磁极搭配96孔板进行免疫磁珠分选的步骤。
1. 将小鼠脾脏样本机械研磨,过筛,处理为单细胞样本,并重悬在EasySep™ Buffer #20144中;
2. 使用有核细胞计数液(3% Acetic Acid + Methylene Blue, 100mL#07060)进行有核细胞计数,将样本调整为1 x 10^8个有核细胞/mL的细胞悬液,并转移至96孔板中,每孔体积在0.05 - 0.2 mL之间。记录此时每孔的样本体积V(mL);
3. 向样本中按照20 µL/mL x V(mL)的体积加入FcR Blocker进行封闭;
4. 向样本中按照50 µL/mL x V(mL)的体积加入EasySep™ Mouse B Cell Isolation Cocktail进行抗体孵育,用枪头吹吸混匀,室温静置孵育10min;
5. 涡旋振荡EasySep™ Streptavidin RapidSpheres™ 50001磁珠30s,确保磁珠无结团;
6. 向样本中按照75 µL/mL x V(mL)的体积加入磁珠,用枪头吹吸混匀,室温静置孵育2.5min;
7. 添加EasySep™ Buffer,将样本定容至每孔0.25mL。轻轻上下吹吸2-3次来混匀。将96孔板置于EasyPlate™磁极上,室温静置孵育2.5min;
8. 小心地吸出(切勿倾倒)富集的细胞悬液至一个新的试管或96孔板。切勿触碰到孔板底部的细胞沉淀。分选后的细胞即可应用于下游实验。
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