在没有磁珠、饲养层细胞或抗原的情况下,实现小鼠T细胞的强烈活化和扩增。
小鼠T细胞激活剂试剂盒ImmunoCult™ Mouse T Cell Activator Kit#100-1572 的温和激活刺激促进了活化T细胞的高活性,可使其在普通小鼠T细胞生长培养基中进一步扩增。该试剂盒由结合并交联CD3和CD28细胞表面配体的抗体复合物组成,并可选择靶向CD2,从而为T细胞培养和活化提供所需的初级和共刺激信号。
使用所有3种试剂盒成分(A、B和C)可在2 - 3天内实现最佳T细胞活化。
组分A包含必需抗原和共刺激激活信号的抗小鼠CD3和CD28抗体。
组分B包含用于任选靶向的抗小鼠CD2抗体。
组分C有助于交联组分A和B中的抗体。所有试剂都是高度稳定、过滤灭菌和可溶的,消除了T细胞培养过程中额外耗时的平板涂布步骤,同时允许无缝衔接到已建立的工作流程中。
ImmunoCult小鼠T细胞激活剂试剂盒可与EasySep工作流程结合使用。
培养准备
A. 小鼠T细胞生长培养基使用成分完全的培养基,如ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基(ImmunoCult™-XF T Cell Expansion Medium#10981)作为小鼠T细胞生长培养基。
建议选择并添加一种抗生素(例如50µg/mL庆大霉素)。
或者,使用无菌技术制备小鼠T细胞生长培养基。将以下成分添加到含有25 mM HEPES的IMDM(Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) with 25 mM HEPES#36150)中,充分混匀:
• 2 mM L-谷氨酰胺(L-Glutamine#07100)
• 50µM ß-巯基乙醇
• 抗生素(例如50µg/mL庆大霉素)
注:其他基础培养基,如RPMI 1640培养基(RPMI 1640 Medium #36750)或DMEM与4500mg/L D-葡萄糖(DMEM with 4500 mg/L D-Glucose#36250),并补充25mM HEPES缓冲溶液(HEPES Buffer Solution#07200),也可用于制备小鼠T细胞生长培养基。
注意:如果不立即使用,请将小鼠T细胞生长培养基在2 - 8°C下保存不超过2周。
B. 小鼠T细胞扩增培养基与激活剂
1. 制备新鲜的小鼠T细胞扩增培养基:加入细胞因子(如30 U/mL小鼠重组IL-2;Mouse Recombinant IL-2#78081)到小鼠T细胞生长培养基(A部分准备)。充分混匀。
注意:小鼠T细胞扩增培养基必须在使用当天制备新鲜的。
2. 制备小鼠CD3/CD28 T细胞激活剂:将以下组分添加到新鲜的小鼠T细胞扩增培养基中(步骤1中准备的):
a.加入ImmunoCult™小鼠T细胞激活剂成分A,稀释比例为1:100。彻底混匀。
b.加入ImmunoCult™小鼠T细胞激活剂组分C,稀释比例为1:100。彻底混匀。
或者制备小鼠CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂:将以下成分添加到新鲜的小鼠T细胞扩增培养基中(步骤1中准备的):
a.加入ImmunoCult™小鼠T细胞激活剂成分A,稀释比例为1:100。彻底混匀。
b.加入ImmunoCult™小鼠T细胞激活剂组分B,稀释比例为1:100。彻底混匀。
c.加入ImmunoCult™小鼠T细胞激活剂组分C,稀释比例为1:100。彻底混匀。
注意:一旦添加了ImmunoCult™小鼠T细胞激活剂,培养基必须在制备当天内使用。
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